RPG-病毒研究-T病毒分離

作者：半人馬│2011-12-13 20:16:29│巴幣：21│人氣：926

具有廣寄主範圍及強烈致命性的新種病毒DV1

半人馬

前言

不知名的病毒，是造成冒險者於遺跡探索時死亡的主要原因。本實驗試圖從血液樣本中分此種不知名病毒。現在我們已經從血液樣本中分離鑑定出一種絲狀病毒，定名為DV1。在這份報告中將呈現這種病毒的形態、寄主範圍和穩定性。

材料與方法

培養基和培養條件

由剛從遺跡中歸來的冒險者白闇持有的十字圓環大劍上的血跡中取得病毒。腦心浸出物培養基(BHI)用於承載病毒(37℃)，人類幹細胞做為宿主(37℃)。SM緩衝液用於病毒的稀釋和保存。

將十字圓環大劍浸入一半濃度的BHI並接種人類幹細胞。培養30分鐘，以1/100體積的氯仿處理培養液，在37℃ 震盪 5 min，然後以6000×g 離心10 min，以0.45-μm膜過濾。將100μl上清液加入含有人類幹細胞的BHI培養基裡，培養30分鐘後，以掃描式電子顯微鏡觀察，確定病毒的存在。

病毒的繁殖和純化

使用人類幹細胞作為宿主培養病毒，病毒感染劑量(MOI)為0.1。培養30分鐘後以氯仿處理5分鐘，10000×g 離心10分鐘，上清液通過0.45μm孔徑膜過濾。過濾的培養液，保存在4℃直至使用。長期儲存，加入7％DMSO存儲在-85°C。

病毒存放在冰上以PEG 8000和NaCl(1M)沉澱至少1小時。在4℃以12000×g離心10分鐘，再以SM緩衝液重新懸浮(原液體積的1 /100)。添加0.5g/ml氯化銫後，混合物在氯化銫梯度最上分層(密度為 1.45，1.50，1.70 g/ml)超清晰的離心管，並在4℃以35,000 rpm離心2小時。在氯化銫(1.50克/毫升)均衡梯度收集病毒，在4℃以41000 rpm再次離心24小時。

收集病毒在pH值7.5，0.5× TE buffer，4℃過夜。

宿主範圍測定

取病毒注射入植物人化的生物體中，測定死亡時間及致死性

病毒穩定性測試

生理鹽水中的穩定性，用生理鹽水(1:100)稀釋病毒培養液，保存在室溫下不同時間，前後皆測病毒的感染性。病毒在不同pH的穩定，以不同pH值的BHI稀釋(1:100)病毒培養液並在室溫下放置24小時。

結果

以掃描式電子顯微鏡觀察確定為絲狀病毒

Fig.1 以掃描式電子顯微鏡在 100,000倍放大倍率下所拍照的DV1

以龍族、惡魔、比蒙、人類、精靈、貓、狗、老鼠、猴子、蛇等十種生命體做為實驗對象，每種10隻個體，注射1ml 病毒培養液後，觀察死亡時間及致死性。老鼠、蛇於感染後5分鐘內死亡，貓、狗於感染後10分鐘內死亡，猴子於感染後15分鐘內死亡，人類、精靈於感染後30分鐘內死亡，比蒙於感染後2小時內死亡，惡魔於感染後4小時內死亡，龍族於感染後一天內死亡，死亡率100%。

為了測試穩定性，保存後測定病毒的感染性，以生理鹽水稀釋1:100後放置在室溫下30天後，病毒仍具有感染性，表明DV1在生理鹽水中的穩定性。在pH值4至13的培養液中病毒可以生存至少24小時，但在pH0到3會失去傳染性。

這些結果表明，DV1有高度穩定性。

結論

DV1為絲狀病毒，其寄主範圍廣泛且致死性極高，在一般環境下，可長時間存在。

經實驗後，推測DV1可能具有空氣傳染性，需經由後續實驗證明。